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Originariamente inviato da Gyxx
Il Western Blot è una tecnica un po più sofisticata che prevede prima il concentrare le proteine del siero (fra cu gli anticorpi) e la successiva separazione.
Le proteine vengono messe in una specie di gelatina e per mezzo di una voltaggio vengono separate in base alla grandezza ed ad altre caratteristiche (io ad esempio sono specializzato in una versione della tecnica in cui si separano prima per pH e poi per grandezza), dopodichè, come fossero su di uno stampo, si estraggono dalla gelatina e si mettono su di una superficie plastica e si testano quasi come con l'Elisa, solo che quii abbiamo l'anticorpo immobilizzato a cui attacchiamo l'antigene (proteina virale). La rivelazione viene fatta con un secondo anticorpo che si lega dietro l'antigene (che infatti è tenuto fermo in quanto legato alla proteina virale attaccata alla plastica mediante l'anticorpo del paziente). Siccome la grandezza degli anticorpi è conosciuta, e siccome ci sono vari tipi di anticorpi (o immunoglobuline), con diverse tempistiche e specificità rispetto allo stadio infettivo, in questo modo, oltre ad avere una riprova dell' infezione, si caratterizza ancor meglio il quadro clinico del paziente.
... cut ...
Spero con questo post kilometrico di aver un po chiartito alcuni punti oscuri, se non altro, del problema della diagnostica. Così magari, sapendo tuti un po più di cosa si parla, ci si può capire e confrontare meglio senza scendere in trivialità da bar.
'Notte
Gyxx
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Visto che stanotte dormicchiavo abbastanza mentre scrivevo, voglio solo aggiungere, x precisione e correttezza, che il caso che ho descritto è un applicazione molto particolare del Western Blot.
Ovvero ho descritto un elettroforesi nativa delle proteine plasmatiche in cui, dopo il trasferimento, si fa legare prima un antigene e poi un altro anticorpo all' antigene.
Normalmente invece le proteine separate vengono trasferite e testate direttamente esse stesse con uno o più anticorpi.
Il metodo, che vuol indicare solo un trasferimento di proteine su una superficie dopo una separazione elettroforetica, si chiama western quasi a presa di giro.
Il primo a usare una tecnica simile fù infatti un ricercatore di cognome Southern, che la usò x trasferire il DNA, da cui il procedimento trae il nome. La tecnica fù poi applicata con succecco anche all 'RNA, e a questo punto fù chiamata molto scherzosamente northen blot, dato che DNA e RNA vengono considerati 2 cose speculari .... quando poi ci si accorse che con lo stesso sistema si poteva operare anche sulle proteine si decise di chiamarte la nuova variante della tecnica western blot.
Ciao ora vo a fre la parte pratica
Gyxx