enzimi di restrizione

[energyfull]

sono curioso di sapere COME vengono estratti gli enzimi di restrizione da cellule varie.. (gli enzimi di restrizione sono enzimi che tagliano il DNA / RNA in presenza di determinate sequenze.. almeno credo..)
premetto di non aver intenzione di clonarmi o di fare chissa' cosa ;)

[gianly1985]

sono curioso di sapere COME vengono estratti gli enzimi di restrizione da cellule varie.. (gli enzimi di restrizione sono enzimi che tagliano il DNA / RNA in presenza di determinate sequenze.. almeno credo..)
premetto di non aver intenzione di clonarmi o di fare chissa' cosa ;)

Bè penso che pigli il tale batterio (selvaggio o modificato geneticamente) che produce l'enzima che ti interessa e glielo fai produrre a manetta :stordita: Poi per "tirarlo fuori" fisicamente e poterlo utilizzare non so...forse devi lisare il batterio e poi depurare gli enzimi oppure se devi fare in modo che il batterio stesso li destini all'esocitosi e poi comunque depurare...in poche parole "boh ma chissene" :)

[energyfull]

ok con il lisare il batterio, ma non ho idea di come depurare gli enzimi..
forse (molto probabilmente) dico stupidate, ma e' possibile "separarli" dalle altre molecole e compagnia situate nel citosol tramite elettroforesi?

[gianly1985]

Boh i metodi di separazione sono tanti e sicuramente ce ne sarà uno specifico per fare queste cose...ma ripeto, chissene ;), nel senso che:
- come interesse personale mi sembra abbastanza inutile impelagarsi nei particolari più pratici, l'importante è aver capito il principio alla base
- come interesse pratico ovviamente ZERO, di certo non puoi farlo tu a casa :)

[energyfull]

ok, ho capito :)
grazie

[Lorekon]

secondo me li fanno ricombinanti, poi più che una elettroforesi (per una produzione "bulk" sarebbe sconveniente) credo che li facciano secernere nel medium di crescita (così non devono fare estrazioni strane) e faranno un colonnone di cromatografia.
credo che sia più o meno così.

[Lorekon]

sono curioso di sapere COME vengono estratti gli enzimi di restrizione da cellule varie.. (gli enzimi di restrizione sono enzimi che tagliano il DNA / RNA in presenza di determinate sequenze.. almeno credo..)
premetto di non aver intenzione di clonarmi o di fare chissa' cosa ;)

cellule varie? sono batteri.
non tagliano l'RNA (o meglio, quelli sono enzimi degli spliceosomi etc.. ma non si usano praticamente)
per clonarti non avresti alcun bisogno degli enzimi di restrizione ;)
non confondere il "clonaggio" del DNA col "clonaggio" di un organismo.

ciao

[Dr Nick Riviera]

sono curioso di sapere COME vengono estratti gli enzimi di restrizione da cellule varie.. (gli enzimi di restrizione sono enzimi che tagliano il DNA / RNA in presenza di determinate sequenze.. almeno credo..)
premetto di non aver intenzione di clonarmi o di fare chissa' cosa ;)

Penso anch'io che li facciano ricombinanti per diminuire i tempi e le spese di estrazione..

Cmq sì, tagliano il DNA quando incontrano una determinata sequenza di nucleotidi..

Clonaggio è una tecnica che, in parole povere, prevede l'inserimento di un gene in un vettore.
Clonazione è una tecnica per ottenere la generazione di soggetti a corredo genetico identico.

[energyfull]

non tagliano l'RNA (o meglio, quelli sono enzimi degli spliceosomi etc.. ma non si usano praticamente)
per clonarti non avresti alcun bisogno degli enzimi di restrizione ;)
non confondere il "clonaggio" del DNA col "clonaggio" di un organismo.

ciao

si... ho confuso un po di cose.. :fagiano:

grazie per la spiegazione